Исследование влияния цисплатина на уровень пероксида водорода и рН в клетках линии HeLa Kyoto с использованием генетически-кодируемых сенсоров
Цель исследования — изучение динамики уровня пероксида водорода и уровня рН в цитоплазме клеток карциномы шейки матки HeLa Kyoto при воздействии цитотоксического препарата с использованием генетически-кодируемых сенсоров пероксида водорода и рН.
Материалы и методы. В работе использованы две клеточные линии карциномы шейки матки человека HeLa Kyoto, содержащие в цитоплазме генетически-кодируемый сенсор пероксида водорода HyPer2 и сенсор pH HyPer2-C199S. Для оценки токсического действия цисплатина в отношении клеток HeLa Kyoto применяли стандартный МТТ-тест. Изменения уровня рН и пероксида водорода (H2O2) определяли методом флюоресцентной микроскопии по изменению соотношения между интенсивностями флюоресценции при возбуждении сенсора на двух длинах волн: 500 и 420 нм (F500/F420). Во время эксперимента клетки содержали в микроинкубаторе при температуре 37,0°С в бескарбонатной бессывороточной среде МЕМ. Раствор цисплатина в конечной концентрации, соответствующей IC50 (по данным проведенного МТТ-теста), добавляли непосредственно в среду культивирования. В качестве контроля использовали среду МЕМ без добавления цисплатина.
Результаты. Добавление цисплатина не вызывало изменений уровня пероксида водорода и рН в цитоплазме клеток линии HeLa Kyoto, экспрессирующих соответствующие сенсоры, в течение всего времени наблюдения (20 мин).
