Возможности озонотерапии в коррекции неспецифической противомикробной резистентности при младенческой форме атопического дерматита

Одним из самых частых осложнений атопического дерматита в детском возрасте является вторичное инфицирование кожи. Вместе с тем известно [1–4], что у большинства детей с атопическим дерматитом выявляется колонизация кожных покровов стафилококком, который способен вызывать обострения заболевания и поддерживать хроническое течение аллергического воспаления кожи посредством секреции суперантигенов, стимулирующих неспецифическую активацию Т-лимфоцитов и макрофагов, синтез провоспалительных цитокинов. Известны данные литературы о высокой эффективности озонотерапии при многих острых и хронических заболеваниях [5], при атопическом дер­матите у взрослых лиц [6, 7], а также при младенческой, детской и подростковой формах атопического дерматита [8–11]; об отсутствии противопоказаний к применению, отсутствии побочных реакций и осложнений при правильном дозировании вводимого озона [5]. Представляет интерес изучение клинических показателей, параметров неспецифической противомикробной резистентности и функциональной активности толл-подобных рецепторов у детей с атопическим дерматитом, в комплексное лечение которых была включена озонотерапия. До настоящего времени подобные исследования не проводились.

Цель исследования — оценить возможности озонотерапии в коррекции неспецифической противомикробной резистентности при младенческой форме атопического дерматита.

Материалы и методы. Под наблюдением находилось 65 детей (40 мальчиков и 25 девочек) в возрасте от 8 мес до 3 лет, страдающих атопическим дерматитом («младенческая форма» заболевания в соответст­вии с рабочей классификацией, представленной в Научно-практической программе «Атопический дер­матит у детей: диагностика, лечение и профилактика», Москва, 2004). У всех пациентов был диагностирован распространенный среднетяжелый атопический дер­матит.

Исследование проведено в соответствии с Хель­синкской декларацией (принятой в июне 1964 г. (Хель­синки, Финляндия) и пересмотренной в октябре 2000 г. (Эдинбург, Шотландия)) и одобрено Этическим комитетом Кировской государственной медицинской академии. От родителей пациентов получено информированное согласие в соответствии с Федеральным законом «Основы законодательства Российской Федерации об охране здоровья граждан» от 22 июля 1993 г. №5487­1.

Наблюдаемые больные атопическим дерматитом были разделены на две группы в зависимости от проводимой терапии. 1-й группе больных (n=33) назначали комплексную общепринятую терапию. Родителям больных детей давали советы по созданию гипоаллергенных условий быта, пациентам назначали индивидуальную гипоаллергенную диету, лечебно-косметический уход за кожей, предусматривающий использование во время ежедневных купаний триактивной эмульсии для купания Эмолиум II, а после купания —­ триактивного увлажняющего крема Эмолиум II, смазывание пораженных участков кожи кремом Адвантан (один раз в день в течение 7–10 дней), прием Зиртека (в течение 2 нед), курсы Хилак-форте, Линекса и Креона, витаминов А, Е, В₅, В₆, В₁₅.

2-й группе больных АД (n=32) назначали такое же комплексное лечение, но в сочетании с двумя курсами озонотерапии. Озонотерапия заключалась в смазывании всех пораженных участков кожи озонированным оливковым маслом (два раза в день в течение 15 дней) и применении ректальных инсуффляций озонокислородной смеси, проводимых через день (всего 8 процедур). Производство озона осуществлялось при помощи синтезатора «А-с-ГОКСф-5-05-ОЗОН» (Электромашино­строительный завод «ЛЕПСЕ», Киров), в котором озон получают действием тихого электрического разряда на кислород. Оливковое масло для наружного применения озонировали до концентрации озона на выходе из синтезатора — 20 мг/мл; время барботирования 100 мл масла составляло 15 мин [5]. При указанной концентрации озона его лечебная доза составляет 75 мкг на 1 кг массы тела. Объем озонокислородной смеси на одну ректальную инсуффляцию рассчитывали по формуле: [масса тела (кг)×75]/20. Средний объем озонокислородной смеси на одну ректальную инсуффляцию составлял 30–40 мл, средний объем озонокислородной смеси на один курс — 240–320 мл. Ректальные инсуффляции озонокислородной смеси проводили с помощью шприца Жане и присоединенной к нему полихлорвиниловой трубки с наконечником в положении больного лежа на левом боку с согнутыми ногами. Перед процедурой пластмассовый наконечник обрабатывали вазелином, помещали в прямую кишку больного на глубину 2 см, затем при медленном надавливании на поршень шприца Жане вводили необходимый объем озонокислородной смеси; вся процедура занимала 1,5–2 мин.

Первый курс озонотерапии начинали с 1–2-го дня наблюдения, второй курс — через 3 мес от начала наблюдения. Никаких осложнений и побочных реакций у пациентов, получавших комплексное лечение в сочетании с озонотерапией, не наблюдалось.

У всех детей изучали клинические показатели, определяли сроки наступления клинической ремиссии и ее продолжительность, проводили посевы с пораженных участков кожи на микрофлору и идентификацию стафилококка. Для оценки состояния неспецифической противомикробной резистентности (НПМР) в первые 1–2 дня наблюдения (период обострения заболевания) и через 23–28 дней от начала лечения (период клинической ремиссии) определяли содержание анти-α-стафилолизина в сыворотке крови, исследовали показатели фагоцитарной активности нейтрофилов (ФАН), фагоцитарного индекса (ФИ) и теста восстановления нитросинего тетразолия (НСТ-тест) в цитоплазме нейт­рофилов, изучали паттерн-распознающие рецепторы — толл-подобные рецепторы (toll-like receptor) TLR-2 и TLR-6. Результаты исследования показателей НПМР у больных атопическим дерматитом сравнивали с данными, полученными у 80 практически здоровых детей того же возраста, проживающих в Кирове и Кировской области.

Посев с участков пораженной кожи и идентификацию стафилококка у больных атопическим дерматитом проводили на желточно-солевом агаре согласно Методическим указаниям Министерства здравоохранения СССР (приказ №534 от 22.04.1985) по применению унифицированных микробиологических (бактериологических) методов исследования в клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений. Содержание анти-α-стафилолизина в сыворотке крови детей определяли в реакции нейтрализации с использованием стафилококкового α-токсина, образца стандартного анти-α-стафилолизина и эритроцитов кролика (Резепов Ф.Ф. с соавт., 1985); результаты выражали в МЕ/мл. ФАН оценивали, используя в качестве фагоцитируемого объекта частицы латекса размером 1,1 мкм (Sigma, США), по методу С.Г. Потаповой с соавт. (1977); результаты выражали в процентах. ФИ рассчитывали как среднее количество частиц латекса, поглощенное одним нейтрофилом. При постановке НСТ-теста активацию нейтрофилов проводили латексом, подсчитывали количество клеток, образующих гранулы диформазана (Петров Р.В. с соавт., 1992); результаты выражали в процентах. Исследование TLR-2 и TLR-6 проводили на проточном цитофлоуриметре Spics XL (Beckman Coulter Inc., США), оценивая показатели экспрессии маркеров CD282 и CD286 («Био-Хим-Мак Диагностика», Москва) на лимфоцитах, моноцитах и нейтрофилах в процентах, а плотности — в условных единицах.

Данные, полученные при исследовании показателей НПМР у больных атопическим дерматитом, обрабатывали методом вариационной статистики с определением средней арифметической величины (М), среднего квадратического отклонения (δ) и средней квадратической ошибки (m), коэффициента достоверности различий между сравниваемыми величинами (p) с использованием таблицы Стьюдента–Фишера. Обработку цифрового материала осуществляли с помощью приложения Microsoft Office Excel Mac 2011.

Результаты и обсуждение. Исследования показали, что у 69% больных младенческой формой распространенного среднетяжелого атопического дерматита обнаруживалась колонизация кожных покровов стафилококком. При посевах с пораженных участков кожи у этих пациентов в периоде обострения заболевания чаще всего высевался Staphylococcus aureus (44%), гораздо реже у них высевались Staphylococcus epidermidis (27%), Staphylococcus saprofites (19%) или микробная ассоциация Staphylococcus aureus + Staphylococcus sapro­fites (10%).

У обеих групп больных атопическим дерматитом в периоде обострения заболевания (табл. 1) отмечались повышение содержания анти-α-стафилолизина в сыворотке крови (p<0,01; p<0,02), снижение показателя фагоцитарной активности нейтрофилов (p<0,001; p<0,001), значений фагоцитарного индекса (p<0,001; p<0,001) и НСТ-теста (p<0,02; p<0,001). При этом статистически значимой разницы между изменениями указанных показателей НПМР в 1-й и 2-й группах больных атопическим дерматитом не обнаруживалось. Не выявлялось также существенных изменений экспрессии толл-подобных рецепторов 2 и толл-подобных рецепторов 6 на лимфоцитах, моноцитах и нейтрофилах у обеих групп больных атопическим дерматитом в периоде обострения заболевания (табл. 2).

Таблица 1. Содержание анти-α-стафилолизина в сыворотке крови и показатели фагоцитоза у здоровых детей и у больных атопическим дерматитом, получавших комплексную общепринятую терапию (1-я группа) и комплексное лечение в сочетании с озонотерапией (2-я группа), М±m

Таблица 2. Показатели экспрессии TLR-2 и TLR-6 у здоровых детей и у больных атопическим дерматитом, получавших комплексную общепринятую терапию (1-я группа) и комплексное лечение в сочетании с озонотерапией (2-я группа), M±m

Установлено, что как комплексная общепринятая терапия, так и комплексное лечение в сочетании с озонотерапией у соответствующих групп больных младенческой формой распространенного среднетяжелого атопического дерматита приводили к улучшению самочувствия и аппетита, нормализации сна, уменьшению и исчезновению кожного зуда и других клинических проявлений заболевания. Однако наступление полной клинической ремиссии у больных атопическим дерматитом, получавших комплексную общепринятую терапию, констатировалось спустя 25,1±1,1 сут, а у получавших комплексное лечение в сочетании с озонотерапией — спустя 19,6±0,9 сут от начала лечения. Следовательно, у группы пациентов, получавших озонотерапию в составе комплексного лечения, наступление клинической ремиссии регистрировалось в среднем на 5,5 сут раньше (p<0,001).

В периоде клинической ремиссии у больных атопическим дерматитом, получавших комплексную общепринятую терапию (см. табл. 1), сохранялись повышение содержания анти-α-стафилолизина (p<0,01) в сыворотке крови, снижение показателя фагоцитарной активности нейтрофилов (p<0,001), значений фагоцитарного индекса (p<0,001) и НСТ-теста (p<0,05). В то же время у данных больных в периоде клинической ремиссии появлялись признаки активации толл-подобных рецепторов (см. табл. 2), что нашло отражение в повышении плотности экспрессии толл-подобных рецепторов 2 на лимфоцитах (p<0,001); в увеличении относительного количества моноцитов (p<0,001) и нейтрофилов (p<0,01), экспрессирующих толл-подобные рецепторы 2; в увеличении относительного количества нейтрофилов (p<0,01), экспрессирующих толл-подобные рецепторы 6.

У больных атопическим дерматитом, получавших комплексное лечение в сочетании с озонотерапией в периоде клинической ремиссии содержание анти-α-стафилолизина в сыворотке крови, показатель фагоцитарной активности нейтрофилов, значения фагоцитарного индекса и НСТ-теста существенно не отличались от этих показателей у практически здоровых детей. Вместе с тем в этой группе больных в периоде клинической ремиссии регистрировались признаки высокой функциональной активности паттерн-распознающих рецепторов, проявляющиеся в повышении плотности экспрессии толл-подобных рецепторов 2 на лимфоцитах (p<0,001); увеличении относительного количества лимфоцитов (p<0,05), моноцитов (p<0,001) и нейтрофилов (p<0,001), экспрессирующих толл-подобные рецепторы 2; в повышении плотности экспрессии толл-подобных рецепторов 6 на лимфоцитах (p<0,001), моноцитах (p<0,01) и нейтрофилах (p<0,001); увеличении относительного количества моноцитов (p<0,001) и нейтрофилов (p<0,001), экспрессирующих толл-подобные рецепторы 6. Полученные данные свидетельствуют о выраженной активации функции толл-подобных рецепторов, играющих ключевую роль в детекции патогенных микроорганизмов, вторгающихся в барьерные ткани человека, и реализации ранних механизмов врожденного иммунитета.

У детей с атопическим дерматитом, получавших комплексную общепринятую терапию, спустя 4,3±0,2 мес от начала клинической ремиссии вновь появлялись признаки обострения заболевания. У больных, которым наряду с комплексным общепринятым лечением были проведены два курса озонотерапии с интервалом между ними в 3 мес, клинические признаки обострения заболевания не регистрировали в течение 14,5±0,3 мес. Таким образом, продолжительность клинической ремиссии у пациентов 2-й группы превышала более чем в три раза (p<0,001) ее продолжительность у пациентов 1-й группы.

Заключение. У больных младенческой формой распространенного среднетяжелого атопического дерма­тита в периоде обострения заболевания обнаруживаются колонизация кожных покровов стафилококком и выраженные изменения показателей неспецифической противомикробной резистентности. У детей, получавших комплексную общепринятую терапию, отмечается наступление непродолжительной клинической ремиссии, во время которой сохраняются изменения показателей неспецифической противомикробной резистентности. Включение озонотерапии в комплексное лечение больных атопическим дерматитом приводит к активации функции толл-подобных рецепторов 2 и толл-подобных рецепторов 6, нормализации содержания анти-α-стафилолизина в сыворотке крови и показателей фагоцитоза, значительному увеличению продолжительности клинической ремиссии.

Финансирование исследования и конфликт интересов. Исследование не финансировалось какими-либо источниками, и конфликты интересов, связанные с данным исследованием, отсутствуют.