Оценка общей токсичности и иммунологической безопасности новой терапевтической вакцины против ВПЧ-ассоциированных заболеваний

Цель исследования — изучить в эксперименте общую токсичность и иммунологическую безопасность новой отечественной терапевтической вакцины против рецидивирующего респираторного папилломатоза и аногенитального кондиломатоза при внутримышечном пути введения.

Материалы и методы. Изучены острая токсичность вакцины по параметрам: клиническая картина интоксикации, величина средней смертельной дозы, изменение массы тела выживших животных; хроническая токсичность — по динамике общего состояния животных, массы тела, гематологических и биохимических показателей периферической крови, функционального состояния центральной нервной системы, сердечно-сосудистой системы, почек, а также патоморфологическим изменениям внутренних органов.

Аллергенность исследовали в тестах общей и активной кожной анафилаксии. Иммунотоксичность оценивали по реакциям прямой гемагглютинации и гиперчувствительности замедленного типа, а также по активности нейтрофилов методом люминолзависимой хемилюминесценции. Оценку пролиферативной активности В- и Т-лимфоцитов по отношению к липополисахаридам и конкавалину А (КонА) проводили в реакции прямой иммунофлюоресценции иммуноцитохимическим методом с использованием моноклональных антител против белка Ki-67.

Результаты. Средние смертельные дозы (LD₅₀) для белых аутбредных крыс и мышей при внутримышечном введении исследуемой вакцины в максимально возможной однократной дозе (25 мл/кг) не были достигнуты. Многократное внутримышечное введение препарата белым аутбредным крысам и кроликам породы шиншилла в дозах соответственно 0,043; 0,43; 0,86 мл/кг и 0,023; 0,23; 0,4 мл/кг не вызывает значительных нарушений функционального состояния основных органов и систем организма экспериментальных животных.

Результаты общей анафилактической и активной кожной анафилактической реакций на препарат у морских свинок-альбиносов в дозах 0,033 и 0,33 мл/кг при внутримышечном введении свидетельствуют об отсутствии у него аллергизирующих свойств.

При внутримышечном введении вакцины мышам-гибридам первого поколения (СВА×С57BL/6)F₁ в дозах 0,084; 2,5 и 25 мл/кг не наблюдается статистически значимого увеличения или снижения интенсивности воспалительной реакции относительно контрольных значений. В дозах 0,084 и 2,5 мл/кг исследуемый препарат не вызывает изменений титра сывороточных антител (IgG), активности фагоцитоза, спонтанной и индуцированной бласттрансформации лимфоцитов по сравнению с контрольной группой. Введение препарата в дозе 25 мл/кг статистически значимо снижает уровень антителообразования относительно контроля, а также оказывает супрессивное влияние на спонтанную и индуцированную фагоцитарную активность и приводит к статистически значимому снижению КонА-индуцированной пролиферативной активности Т-лимфоцитов по количеству Ki-67 положительных клеток в сравнении с группой контроля.

Заключение. Исследование у животных различных видов общей токсичности вакцины против рецидивирующего респираторного папилломатоза и аногенитального кондиломатоза при внутримышечном пути введения показало, что данная вакцина является малотоксичным препаратом, иммунологически безопасным в диапазоне доз от 0,033 до 2,5 мл/кг.

1. Barr E., Sings H.L. Prophylactic HPV vaccines: new interventions for cancer control. Vaccine 2008 Nov 18; 26(49): 6244–6257, http://dx.doi.org/10.1016/j.vaccine.2008.07.056.
2. Kahn J.A. Vaccination as a prevention strategy for human papillomavirus-related diseases. J Adolesc Health 2005 Dec; 37(6 Suppl): S10–S16, http://dx.doi.org/10.1016/j.jadohealth.2005.08.018.
3. Мазитова Л.П., Асламазян Л.К., Намазова Л.С., Шаипов Т.С. Особенности клинического течения, диагностика и подходы к терапии папилломавирусной инфекции в детском возрасте. Педиатрическая фармакология 2006; 3(6): 51–54.
4. Козлов Д.Г., Чеперегин С.Э., Губайдуллин И.И., Еф­ремов Б.Д., Тюрин О.В., Залунин И.А. Способ получения белка Е7-HSP70 и штамм дрожжей Saccharomyces cerevisiae для его осуществления. Патент РФ 2489481. 2013.
5. Chu N.R., Wu H.B., Wu T., Boux L.J., Siegel M.I., Mizzen L.A. Immunotherapy of a human papillomavirus (HPV) type 16 E7-expressing tumour by administration of fusion protein comprising Mycobacterium bovis bacille Calmette-Guérin (BCG) HSP65 and HPV16 E7. Clin Exp Immunol 2000 Aug; 121(2): 216–225, http://dx.doi.org/10.1046/j.1365-2249.2000.01293.x.
6. Chu N.R. Therapeutic vaccination for the treatment of mucosotropic human papillomavirus-associated disease. Expert Opin Biol Ther 2003 Jun; 3(3): 477–486, http://dx.doi.org/10.1517/14712598.3.3.477.
7. Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. Ч. 1. Под ред. Миро­нова А.Н. М: Гриф и К; 2012; 944 с.
8. ICH guideline S6 (R1) — preclinical safety evaluation of biotechnology-derived pharmaceuticals. Available from: http://www.ema.europa.eu/docs/en_GB/document_library/Scientific_guideline/2009/09/WC500002828.pdf.
9. Ураков А.Л. Основы клинической фармакологии. Ижевск: Ижевский полиграфкомбинат; 1997; 164 с.
10. Note for guidance on repeated dose toxicity. Available from: http://www.ema.europa.eu/docs/en_GB/document_library/Scientific_guideline/2009/09/WC500003102.pdf.
11. Allen R.C. Chemiluminescence and the study of phagocyte redox metabolism. Adv Exp Med Biol 1982; 141: 411–421, http://dx.doi.org/10.1007/978-1-4684-8088-7_39.
12. Gerdes J., Schwab U., Lemke H., Stein H. Production of a mouse monoclonal antibody reactive with a human nuclear antigen associated with cell proliferation. Int J Cancer 1983 Jan 15; 31(1): 13–20, http://dx.doi.org/10.1002/ijc.2910310104.

Kukharenko A.E., Babaev A.A., Shchelchkova N.A., Lapshin R.D., Vedunova М.V., Gravel I.V., Mukhina I.V., Lovtsova L.V. Estimation of General Toxicity and Immunological Safety of a Novel Therapeutic Vaccine Against Human Papillomavirus-Assosiated Diseases. Sovremennye tehnologii v medicine 2015; 7(2): 92, https://doi.org/10.17691/stm2015.7.2.12