Способ оценки эффективности комплексной терапии с использованием иммуномодуляторов при хронических дерматологических заболеваниях

Значительное количество патологий человека протекает на фоне иммунной недостаточности, что определяет тяжесть клинических проявлений хронических заболеваний, а также развитие осложнений и ухудшение прогноза [1]. Чтобы добиться достаточного клинического эффекта при заболеваниях, торпидных к проводимой стандартной терапии, в схему комплексного лечения часто вводятся иммуномодулирующие препараты [2−4]. Дерматологические заболевания развиваются на фоне изменений реактивности организма, сопровождаются нарушениями в работе иммунных факторов и склонны к хроническому рецидивирующему течению. Поэтому использование в их лечении иммуномодуляторов является важной частью комплексной терапии. Однако до сих пор не существует алгоритма, позволяющего определиться с точным выбором и оценкой эффективности действия иммуномодулятора, используемого в ходе комплексной терапии различных патологических состояний [5−7].

Одним из простых и неинвазивных методов для выявления патологических изменений в организме человека служит оценка уровня естественной колонизации буккальных эпителиоцитов [8, 9]. Способность к адгезивным взаимодействиям является важнейшей функциональной характеристикой эпителиоцитов и может быть источником важной диагностической и прогностической информации [10].

В работе нами была сделана попытка оценить информативность показателя естественной колонизации буккальных эпителиоцитов при определении эффективности комплексной терапии хронических патологий: микробной экземы и онихомикоза дрожжевого генеза с использованием иммуномодулирующих препаратов Полиоксидоний и Деринат. Выбор данных препаратов был обусловлен их широким применением в различных областях медицины (педиатрия, гинекология, кардиология, онкология и др.) [2].

Цель исследования — определить значимость показателя естественной колонизации эпителиоцитов в оценке эффективности лечебно-профилактических мероприятий с использованием иммуномодуляторов у больных с микробной экземой и онихомикозом дрожжевого генеза.

Материалы и методы. Естественная колонизация буккальных эпителиоцитов исследована у 52 больных микробной экземой. Часть пациентов с микробной экземой (n=28) получали терапию согласно стандарту лечения данного заболевания. В группе с комбинированной терапией (n=24) пациентам дополнительно назначали иммуномодулятор Полиоксидоний (азоксимера бромид) (НПО «Петровакс Фарм», Россия) 24 мг 2 раза в день 10 дней.

Также в работе исследованы буккальные эпителиоциты, полученные от больных с онихомикозом до и после курса лечения: после классического лечения антимикотиками (n=26) и комплексного лечения с препаратом Деринат (дезоксирибонуклеат натрия, ФП «Техномедсервис, Россия) (n=27) — внутримышечно по 5 мл 1,5% раствора с интервалом 24–72 ч, курс 5–10 инъекций.

Контрольную группу (n=28) составили здоровые мужчины и женщины 21–38 лет.

Исследование проведено в соответствии с Хельсинкской декларацией, принятой в июне 1964 г. (Хельсинки, Финляндия) и пересмотренной в октябре 2000 г. (Эдинбург, Шотландия), и одобрено Этическим комитетом НижГМА. От каждого пациента получено информированное согласие.

Буккальные эпителиоциты получалиутром, натощак, с внутренней поверхности щеки, дважды отмывали (40 g, 5 мин) забуференным физиологическим раствором, готовили взвесь с концентрацией 10⁶ кл./мл. Оценку естественной колонизации у пациентов проводили путем подсчета общего количества бактериальных клеток, адгезированных на эпителиоцитах. Из суспензии буккальных эпителиоцитов готовили мазки, фиксировали метанолом (10 мин), окрашивали 0,25% водным раствором азура А (Sigma-Aldrich, США). Индекс естественной колонизации оценивали по числу бактериальных клеток в пересчете на один эпителиоцит (бакт./эп.). Учитывали средний результат после подсчета 100 эпителиоцитов (рис. 1).

Рис. 1. Естественная колонизация буккального эпителиоцита; ×900; окраска азуром А

Для оценки значимости индекса естественной колонизации буккального эпителия в определении эффективности комплексной терапии мы сравнили его изменения с изменениями растворимых молекул межклеточной адгезии sICAM-1 и иммуноглобулинов IgG, IgЕ. Исследование их уровня проводили методом иммуноферментного анализа на спектрофотометре Bio-Rad 480 (Bio-RadLaboratories, США). Кровь из локтевой вены отбирали утром натощак в объеме 5 мл, получали сыворотку путем центрифугирования (1000 g, 20 мин, 4°С). Для определения уровня иммуноглобулинов и sICAM-1 использовали коммерческие тест-системы («Вектор Бест», Россия и Bender MedSystems, Австрия).

Статистическую обработку данных проводили по общепринятой методике. Рассчитывали среднюю арифметическую и ее стандартную ошибку (М±m). Достоверность различий оценивали при помощи критериев Вилкоксона и Манна–Уитни. Различия расценивали как статистически значимые при р<0,05.

Результаты и обсуждение. Исследования показали, что у больных микробной экземой до лечения наблюдалось повышение средних значений всех выбранных показателей (см. таблицу). Стандартная схема лечения приводила к несущественному снижению индекса естественной колонизации — с 36,79±15,52 до 35,12±15,21 бакт./эп. После комплексной терапии с использованием препарата Полиоксидоний индекс естественной колонизации снижался в большей степени (p>0,05) и составлял 26,47±12,03 бакт./эп., приближаясь к показателям в контрольной группе — 14,31±6,91 бакт./эп. (рис. 2).

Естественная колонизация буккального эпителия и сывороточные показатели у больных с микробной экземой при различных схемах лечения (М±m)

Рис. 2. Уровень естественной колонизации буккальных эпителиоцитов у больных микробной экземой при лечении с использованием иммуномодулятора Полиоксидоний

Концентрация сывороточных факторов sICAM-1, IgG и IgE также повышалась при патологии, однако в отличие от индекса естественной колонизации не отражала динамику положительных изменений в ходе лечения заболевания (см. таблицу).

На следующем этапе исследования проводили оценку изменения уровня естественной колонизации буккального эпителия на фоне комплексного лечения онихомикозов, вызываемых грибами рода Candida, с использованием препарата Деринат.

Установлено, что индекс естественной колонизации эпителиоцитов у больных онихомикозом был также существенно выше, чем у здоровых: 45,32±22,14 бакт./эп. против 14,30±7,89 бакт./эп. (рис. 3).

Рис. 3. Уровень естественной колонизации буккальных эпителиоцитов у пациентов с онихомикозом при лечении с использованием иммуномодулятора Деринат

После проведенного курса стандартного лечения онихомикоза дрожжевого генеза индекс естественной колонизации был ниже и составлял 34,19±17,21 бакт./эп.(p>0,05). При комплексной терапии с использованием препарата Деринат индекс естественной колонизации снижался в большей степени — до 23,71±11,0 бакт./эп. (p>0,05), приближаясь к показателям в контрольной группе.

Таким образом, повышение уровня естественной колонизации буккальных эпителиоцитов наблюдалось при обеих патологиях (см. рис. 2, 3). При этом на фоне комплексной терапии уровень микробной колонизации буккальных эпителиоцитов снижался достаточно быстро (в течение 10–14 дней), приближаясь к значениям, характерным для здоровых людей. Кроме того, при проведении комплексной терапии микробной экземы изменение уровня естественной колонизации было выражено намного сильнее, чем у сывороточных показателей (sIСАM, IgE).

Известно, что уровень естественной колонизации эпителиоцитов во многом зависит от индивидуальных особенностей человека, его мукозального иммунитета, а также наличия сопутствующих патологий, в частности заболеваний полости рта (кариес и др.) [11]. Этим можно объяснить тот факт, что изменение индекса естественной колонизации у группы пациентов как на фоне заболевания, так и после лечения имело характер тенденции, поскольку у ряда больных данная динамика отсутствовала. Тем не менее возвращение к нормальным значениям уровня естественной колонизации эпителиоцитов наблюдалось у большинства людей после лечения с использованием иммуномодуляторов. Так, статистически значимое (p<0,05) уменьшение и нормализация индекса естественной колонизации отмечались у 62,6% больных с онихомикозом после комплексной терапии с использованием препарата Деринат. Эффективность комплексной терапии с иммуномодулятором Полиоксидоний при микробной экземе была еще выше: выраженная позитивная динамика наблюдалась у 72,3% пациентов (p<0,05). У меньшей группы больных уровень естественной колонизации эпителиоцитов существенно не изменялся после проведенного курса лечения, что могло свидетельствовать либо об отсутствии терапевтического эффекта в данной группе пациентов, либо о наличии у них дополнительной (невыявленной) патологии. В целом можно считать, что введение иммунодуляторов в схему комплексной терапии микробной экземы и онихомикоза дрожжевого генеза имеет положительный результат, хотя и не является панацеей.

Заключение. Сравнение уровня естественной колонизации буккальных эпителиоцитов у пациентов с хроническими дерматологическими заболеваниями до и после проведенного курса лечения является доступным методом, позволяющим в короткие сроки оценить эффективность терапевтических мероприятий, в том числе с использованием иммуномодулирующих препаратов.

Финансирование исследования и конфликт интересов. Исследование не финансировалось какими-либо источниками, и конфликты интересов, связанные с данным исследованием, отсутствуют.