Сфингомиелины локальных жировых депо и сыворотки крови как перспективные биомаркеры сердечно-сосудистых заболеваний

Введение

Известно, что центральную роль в развитии сердечно-сосудистых заболеваний (ССЗ) играют нарушения липидного обмена. Хотя определение содержания общего холестерола/холестерина (ОХС), холестерола/холестерина липопротеинов высокой, низкой, очень низкой плотности (ХС-ЛПВП, ХС-ЛПНП, ХС-ЛПОНП соответственно) и триацилглицеридов обеспечивает приемлемую оценку вероятности неблагоприятных сердечно-сосудистых событий, имеются данные о высоком остаточном риске при достижении целевых значений этих показателей, поскольку и другие липиды могут служить независимыми от холестерола факторами заболевания [1]. В настоящее время внимание ученых уделяется в основном исследованию липидного спектра плазмы/сыворотки крови, но эта оценка не всегда адекватно отражает локальные дисфункциональные изменения в жировой ткани (ЖТ), что не позволяет выявить всех пациентов с высоким риском ССЗ [1].

Прогресс в области липидомики за последние 20 лет способствовал активному изучению метаболической дисрегуляции ЖТ при ССЗ. Однако информация относительно содержания липидов в эпикардиальной (ЭЖТ) и периваскулярной жировой ткани (ПВЖТ), наиболее близко расположенных к очагу поражения, прак­тически отсутствует, хотя локальные жировые депо сердца метаболически активны и могут приводить к развитию/прогрессированию ишемической болезни сердца (ИБС) посредством паракринного высвобождения проатерогенных медиаторов [2, 3].

Среди биологически активных липидов наибольший интерес вызывают сфинголипиды, регулирующие многочисленные клеточные функции и ассоциированные с ССЗ. Особое место занимают сфингомиелины (sphingomyelin, SM), состоящие из фосфохолиновой головной группы, сфингозина и жирной кислоты [4].

Сфингомиелины образуются из церамидов, синтезированных в эндоплазматическом ретикулуме, с помощью сфингомиелинсинтазы (SMS). Фермент SMS относится к группе фосфолипаз и имеет несколько изоформ: SMS1 (кодируется геном SGMS1) отвечает за синтез SМ в аппарате Гольджи, SMS2 (SGMS2) локализуется преимущественно в плазматической мембране [4].

Сфингомиелин считается одним из наиболее распространенных сфинголипидов ЖТ и сыворотки крови человека [5]. Так, на долю SM приходится около 87% от общего количества сывороточных сфинголипидов [6]. Ранее проведенные исследования показали, что повышение уровня сывороточных SМ является фактором риска ССЗ [7]. Кроме того, выявлены корреляции между увеличением SM и чувствительностью к инсулину, между развитием ИБС и ожирением [8]. Однако источники избыточного сывороточного уровня SM до сих пор не определены.

Несмотря на многочисленные попытки идентификации SM, определения их критического уровня, биологических функций, способа транспортировки, управления синтезом и обнаружения зависимых от SM сигнальных путей при ССЗ, данные о спектре SM в ЖТ человека на сегодняшний день практически отсутствуют [9], в то время как мониторинг изменений уровня SМ позволит оценивать и прогнозировать тяжесть и/или прогрессирование ССЗ, а также использовать их в качестве новых потенциальных мишеней для терапевтического воздействия. Поэтому управление сфингомиелиновым спектром может быть многообещающей стратегией лечения сердечно-сосудистых и метаболических заболеваний.

Цель исследования — оценить сфингомиелиновый спектр локальных жировых депо и сыворотки крови во взаимосвязи с клинико-инструментальными показателями у пациентов с ишемической болезнью сердца и с дегенеративными приобретенными пороками сердца.

Материалы и методы

Характеристика пациентов. Сфингомиели­но­вый спектр локальных жировых депо и сыворотки крови определен у 30 пациентов с ИБС и 30 пациентов с дегенеративными приобретенными пороками сердца (ППС) — стенозом/недостаточностью аортального и митрального клапанов. Протокол исследования утвержден локальным этическим комитетом Научно-исследовательского института комплексных проблем сердечно-сосудистых заболеваний. Пациентов подбирали в соответствии с критериями включения и исключения, руководствуясь ГОСТ Р 52379—2005 («Надлежащая клиническая практика») и принципами Хель­синкской декларации Всемирной медицинской ассоциации («Этические принципы проведения медицинских исследований с участием людей в качестве субъектов исследования»), с учетом изменений, принятых в 2013 г., а также «Правилами клинической практики в Российской Федерации», утвержденными Приказом Минздрава России N 266 от 19.06.2003 г.

Все пациенты имели показания для проведения открытого вмешательства на сердце — прямой реваскуляризации миокарда методом коронарного шунтирования или операции на клапанах сердца. В исследование не включали пациентов старше 75 лет, с наличием клинически значимых сопутствующих патологий (сахарного диабета 1-го и 2-го типов, инфаркта миокарда, анемии, почечной и печеночной недостаточности, онкологических и инфекционно-воспалительных заболеваний в период обострения, аутоиммунных заболеваний). Критериями включения для пациентов группы сравнения служили верифицированный ППС, согласие на проведение исследования.

Пациенты исследуемых групп были сопоставимы по полу и возрасту (см. таблицу). В анамнезе лиц с ИБС чаще фиксировали такие факторы риска ССЗ, как артериальная гипертензия, дислипидемия, курение. Уровни ОХС, ХС-ЛПНП и индекс атерогенности пациентов с ИБС превышали аналогичные показатели у лиц с ППС. Содержание ХС-ЛПВП, напротив, было выше в группе ППС.

---

Клиническая характеристика пациентов с сердечно-сосудистыми заболеваниями

---

Пациенты с ППС чаще страдали хронической сердечной недостаточностью (ХСН) II функционального класса (ФК). Систолическую функцию левого желудочка (ЛЖ) у пациентов оценивали по фракции выброса ЛЖ по Тейхольцу; она составила 53,6 [46,3; 58,9]% у пациентов с ИБС и 51,6 [42,5; 55,8]% — в группе ППС, что соответствует сохраненной фракции выброса.

В течение госпитального периода все пациенты получали стандартную медикаментозную терапию в соответствии с рекомендациями Министерства здравоохранения РФ (2020) и Европейского общества кардиологов (2020) (см. таблицу).

Во время оперативного вмешательства (коронарного шунтирования или коррекции пороков сердца) были получены образцы ЖТ подкожной (ПЖТ), эпикардиальной и периваскулярной локализации (3–5 г), которые подвергали криогенной заморозке жидким азотом с последующим хранением при температуре –150°С. Источником ПЖТ служила подкожная клетчатка нижнего угла средостенной раны, ЭЖТ — зоны ее наибольшего присутствия (правые отделы сердца — правое предсердие и правый желудочек), ПВЖТ — область правой коронарной артерии.

Липидомный состав сыворотки крови и ЖТ пациентов был определен с использованием хромато-масс-спектрометрического комплекса высокого разрешения — жидкостного хроматографа серии Agilent 1200 (Agilent Technologies, США) с масс-спектрометрическим детектором maXis impact (Bruker Daltonics, Германия). Для определения SM-состава образцов сыворотки крови и ЖТ предварительно проводили жидкостно-жидкостную экстракцию с помощью хлороформа, метанола и воды. Для анализа SM в анализируемых пробах использован метод высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с масс-спектрометрическим детектированием в диапазоне отношений масса/заряд от 100 до 1700. Для идентификации SM выполняли тандемную масс-спектрометрию (МС) в режиме зависимого сканирования с шириной окна 5 Да. Исходные файлы, полученные в результате ВЭЖХ-МС, конвертировали с помощью программы msConvert из пакета ProteoWizard 3.0.9987 в открытый формат MzXml, содержащий информацию о масс-спектре в любой момент времени, и в формат ms2, содержащий информацию о тандемных масс-спектрах в заданный момент времени. Использовали также программу MzMine для выделения пиков, нормирования на полный ионный ток и создания таблицы, содержащей информацию о массе иона, площади его хроматографического пика и времени выхода. Идентификацию SM проводили средствами скриптов LipidMatch путем сопоставления значений отношения массы к заряду (m/z) экспериментальных фрагментов со значениями m/z библиотеки фрагментации in silico, содержащей более 500 000 видов липидов, которые охватывают более 60 типов липидов, что делает LipidMatch одной из наиболее полных и точных баз данных и номенклатуры липидов (LipidMaps). Работа выполнена с использованием оборудования Центра клинического пользования «Клиническая масс-спектрометрия» НМИЦ АГП имени В.И. Кулакова Минздрава России.

Условия хроматографического анализа профиля липидов в режиме положительных и отрицательных ионов. Исследования проводились с использованием системы ВЭЖХ-МС/МС, состоящей из гибридного квадрупольного времяпролетного масс-спектрометрического детектора maXis impact (Bruker Daltonics, Германия) и жидкостного хроматографа Dionex UltiMate 3000 (Thermo Scientific, США). Для хроматографического определения липидомного спектра SM применяли колонку ZORBAX SB-C18, 0,5×150 мм; 3,5 мкм (Agilent Technologies, США) с предколонкой Security Guard (Phenomenex, США). Исследования проводили при следующих условиях.

1. Температура термостата — 50°C.
2. Состав и режим подвижной фазы:

элюент А — 10 мМ раствора ацетата аммония в смеси муравьиная кислота–вода–ацетонитрил (0,1:40:60%), об:об;

элюент В — 10 мМ раствора ацетата аммония в смеси муравьиная кислота–вода–ацетонитрил–изоппропиловый спирт (0,1:2:8:90%), об:об.

3. Скорость потока элюента — 35 мкл/мин.
4. Объем вводимой пробы — 0,5 мкл (в режиме положительных ионов), 1,0 мкл (в режиме отрицательных ионов).
5. Раствор для промывки иглы — ацетонитрил.
6. Параметры масс-спектрометрического детектирования:

диапазон отношения масса/заряд — 100–1700;

напряжение на капилляре — 4500 В (в режиме положительных ионов), 3000 В (в режиме отрицательных ионов);

давление газа-распылителя — 0,6 Бар;

поток осушающего газа — 5 л/мин;

температура осушающего газа — 200°С;

время регистрации хроматограммы — 25 мин.

Приготовление образцов сыворотки крови пациентов. К 100 мкл сыворотки крови добавляли 375 мкл воды очищенной и 1200 мкл смеси хлороформ:метанол в соотношении 2:1, об:об. Полученную смесь тщательно перемешивали на мульти-вортексе V-32 (Biosan, Латвия) в течение 10 мин, затем центрифугировали при скорости вращения 16 000 об./мин также в течение 10 мин. Отбирали 555 мкл нижнего органического слоя и добавляли еще 440 мкл смеси хлороформ:метанол в соотношении 2:1, об:об. Полученную смесь также тщательно перемешивали на мульти-вортексе V-32 в течение 5 мин, затем центрифугировали при скорости вращения 16 000 об./мин в течение 10 мин. Отбирали еще 200 мкл нижнего органического слоя и упаривали досуха при помощи концентратора в токе азота MULTIVAP (Organomation, США) при комнатной температуре 15 мин. Затем сухой остаток растворяли в 100 мкл смеси изопропиловый спирт:ацетонитрил в соотношении 50:50%, об:об, полученную смесь опять перемешивали на мульти-вортексе V-32 в течение 5 мин, затем центрифугировали при скорости вращения 16 000 об./мин в течение 10 мин. 80 мкл супернатанта переносили в виалу со вставкой, и 10 мкл каждого образца пулировали для приготовления образца контроля качества.

Приготовление образцов жировой ткани пациентов. К образцу гомогенизированных адипоцитов локальных жировых депо нормализованной массы добавляли 700 мкл смеси хлороформ:метанол в соотношении 2:1, об:об. Полученную смесь помещали в ульразвуковую ванну на 10 мин, затем добавляли 440 мкл воды очищенной и тщательно перемешивали на мульти-вортексе V-32 в течение 5 мин, после чего центрифугировали при скорости вращения 16 000 об./мин в течение 10 мин. Отбирали 200 мкл нижнего органического слоя и добавляли еще 500 мкл смеси хлороформ:метанол в соотношении 2:1, об:об. Полученную смесь также тщательно перемешивали на мульти-вортексе V-32 в течение 5 мин, затем центрифугировали при скорости вращения 16 000 об./мин в течение 10 мин. Отбирали еще 400 мкл нижнего органического слоя и упаривали досуха при помощи концентратора в токе азота MULTIVAP (Organomation, США) при комнатной температуре 15 мин. Затем сухой остаток растворяли в 1000 мкл смеси изопропиловый спирт:ацетонитрил в соотношении 50:50%, об:об, полученную смесь перемешивали на мульти-вортексе V-32 в течение 5 мин, затем центрифугировали при скорости вращения 16 000 об./мин в течение 10 мин. 200 мкл супернатанта переносили в виалу со вставкой, и 10 мкл каждого образца пулировали для приготовления образца контроля качества. Полученные результаты нормировали на степень разбавления образцов и массу навески.

Статистический анализ результатов проводили с помощью программы GraphPad Prism 8 (GraphPad Software, США). Данные представлены в виде медианы, 1-го и 3-го квартилей. Уровни SM в сыворотке крови и ЖТ определяли в относительных величинах. Межгрупповые различия выявляли при помощи непараметрических критериев. Для сравнения трех независимых групп применяли критерий Краскела–Уоллиса с последующим попарным сравнением с использованием U-критерия Манна–Уитни. Сравнение двух независимых групп выполняли при помощи U-критерия Манна–Уитни. Категориальные переменные, выраженные в процентах, сравнивали с использованием критерия хи-квадрат или точного критерия Фишера. Оценку взаимосвязи уровней сывороточных SM с SM в образцах ЖТ и с параметрами липидного спектра у пациентов с ССЗ проводили при помощи непараметрической ранговой корреляции Спирмена (r). Зависимость наличия ИБС от уровней SM в сыворотке крови оценивали методом логистической регрессии. Во всех процедурах статистического анализа различия считали статистически значимыми при достигнутом уровне значимости p<0,05.

Результаты

При анализе сфингомиелинового спектра подкожной, эпикардиальной и периваскулярной ЖТ пациентов с ИБС и ППС выявлены следующие виды сфингомиелинов: SM(d16:0/24:1), SM(d18:1/16:0), SM(d18:1/18:0), SM(d18:1/18:1), SM(d18:1/22:0), SM(d18:1/24:0), SM(d18:1/24:1) и SM(d18:2/24:0) (рис. 1). Наиболее часто встречающимся основанием обнаруженных сфингомиелинов был C18-сфингозин (d18:1 и d18:2). Был также выявлен С16-сфингозин (d16:0). При этом SM содержали в основном насыщенные жирные кислоты.

---

Рис. 1. Сфингомиелиновый спектр жировой ткани различной локализации у пациентов с сердечно-сосудистыми заболеваниями * статистически значимые различия между пациентами с ишемической болезнью сердца и приобретенными пороками сердца, р<0,05

---

При анализе особенностей спектра SM в ЖТ установлено, что ЭЖТ пациентов с ИБС характеризовалась более высоким уровнем всех обнаруженных SM по сравнению с подкожной и периваскулярной ЖТ (р<0,05). В ПВЖТ лиц с ППС наблюдалось статистически значимое увеличение уровней всех SM относительно ЭЖТ (р<0,05) и уровней SM(d16:0/24:1), SM(d18:1/16:0), SM(d18:1/18:0), SM(d18:1/18:1), SM(d18:1/24:1) — относительно ПЖТ (р<0,05).

Анализ индивидуальных особенностей SM в ЖТ показал, что ПЖТ пациентов с ИБС характеризовалась более высоким уровнем SM с очень длинноцепочечными жирными кислотами — SM(d16:0/24:1), SM(d18:1/24:0) — по сравнению с ПВЖТ (р=0,023; р=0,0026 соответственно). Однако содержание SM с длинноцепочечными жирными кислотами SM(d18:1/16:0), SM(d18:1/18:0), SM(d18:1/18:1) и с очень длинноцепочечными жирными кислотами — SM(d18:1/22:0), SM(d18:1/24:1) — в ПЖТ было ниже, чем в ПВЖТ (р=0,0001; р=0,0015; р=0,0002; р=0,006; р=0,013 соответственно) (см. рис. 1).

Подкожная ЖТ пациентов с ППС содержала больше SM с длинноцепочечными жирными кислотами — SM(d16:0/24:1), SM(d18:1/18:1), SM(d18:1/22:0), SM(d18:1/24:0), SM(d18:1/24:1), SM(d18:2/24:0) и SM(d18:1/16:0), чем ЭЖТ. В то же время ЭЖТ пациентов с ППС содержала меньше таких SM относительно ПВЖТ — (SM(d16:0/24:1), SM(d18:1/16:0), SM(d18:1/18:0), SM(d18:1/18:1), SM(d18:1/22:0), SM(d18:1/24:0), SM(d18:1/24:1), SM(d18:2/24:0) — и ПЖТ ((SM(d16:0/24:1), SM(d18:1/16:0), SM(d18:1/18:1), SM(d18:1/22:0), SM(d18:1/24:0), SM(d18:1/24:1), SM(d18:2/24:0)).

Оценка межнозологических различий сфингомиелинового спектра локальных жировых депо показала статистически значимое снижение уровня обнаруженных SM в ПЖT, кроме SM(d16:0/24:1) — это наблюдалось чаще у пациентов с ИБС по сравнению с лицами с ППС. ЭЖТ лиц с ИБС демонстрировала увеличение уровней всех обнаруженных SM относительно группы ППС. А ПВЖТ лиц с ИБС, напротив, была менее богата SM, чем в группе ППС.

В сыворотке крови пациентов с ИБС и ППС выявлен следующий сфингомиелиновый спектр: SM(d16:1/16:0), SM(d16:1/18:0), SM(d18:0/22:3), SM(d18:0/22:4), SM(d18:1/16:0), SM(d18:1/18:0), SM(d18:1/18:1), SM(d18:1/20:0), SM(d18:1/22:0), SM(d18:1/24:0), SM(d18:1/24:1), SM(d18:2/16:0), SM(d18:2/20:0), SM(d18:2/22:0), SM(d18:2/24:1), SM(d22:1/20:3). Обнаруженные SM содержали длинно- и очень длинноцепочечные жирные кислоты. При этом уровни практически всех измеренных видов сывороточных SM были статистически значимо выше у пациентов с ИБС по сравнению с уровнями в группе ППС (р<0,05) либо имели тенденцию к повышению (р>0,05). Самым распространенным основаниемсывороточных сфингомиелинов, как и в ЖТ, был C18-сфингозин (d18:0, d18:1 и d18:2), также обнаружен С16-сфингозин (d16:1). Кроме того, в сыворотке крови пациентов, в отличие от локальных жировых депо, выявлен С22-сфингозин (d22:1) (рис. 2).

---

Рис. 2. Сывороточные уровни сфингомиелина у пациентов с сердечно-сосудистыми заболеваниями * статистически значимые различия между пациентами с ишемической болезнью сердца и приобретенными пороками сердца, р<0,05

---

Большинство видов сывороточных SM имели в своем составе различные насыщенные ацильные цепи (С16:0, С18:0, С20:0, С22:0 и С24:0), как и в локальных жировых депо. Обращает на себя внимание наличие полиненасыщенных жирных кислот в составе сывороточных SM (С20:3, С22:3, С22:4), чего не наблюдалось в ЖТ.

Таким образом, у пациентов с ССЗ в сыворотке крови, в отличие от локальных жировых депо, выявлен SM, в основании которого — С22-сфингозин (d22:1), а также полиненасыщенные жирные кислоты (С20:3, С22:3, С22:4). Обнаруженными как в сыворотке крови пациентов, так и в их локальных жировых депо, были SM(d18:1/16:0), SM(d18:1/18:0), SM(d18:1/18:1), SM(d18:1/22:0), SM(d18:1/24:0), SM(d18:1/24:1), основанием которых служил C18-сфингозин (d18:1) (см. рис. 1 и 2). На основании выявленных различий можно предположить, что сфингомиелиновый профиль сыворотки крови лишь частично соответствует (отражает) содержанию SM в ЖТ.

Уровни SM в образцах ЖТ и сыворотки крови коррелировали между собой преимущественно у пациентов с ИБС (рис. 3).

---

Рис. 3. Взаимосвязь сфингомиелинов локальных жировых депо с их сывороточными уровнями у пациентов с сердечно-сосудистыми заболеваниями

---

В исследовании выявлены отрицательные взаимо­связи сывороточных длинноцепочечных SM, обладающих кардиопротективным действием, с ОХС, ХС-ЛПНП, триацилглицеридами. С16-сфингозин, наиболее опасный для сердечно-сосудистой системы, отрицательно коррелировал с ХС-ЛПВП, индексом атерогенности при ИБС. При ППС выявлены схожие корреляции, но в меньшем количестве (рис. 4).

---

Рис. 4. Взаимосвязь сывороточных сфингомиелинов с параметрами липидного спектра у пациентов с сердечно-сосудистыми заболеваниями

---

При коронарогенной патологии SM, в состав которых входит остаток церамидов С16 и С18, вызывающих неблагоприятные сердечно-сосудистые эффекты, положительно коррелировали с антропометрическими (возраст, индекс массы тела) и гемодинамическими (частота сердечных сокращений, систолическое артериальное давление) показателями, отрицательно — с ХС-ЛПВП, в отличие от лиц с пороками сердца, у которых выявлены лишь единичные корреляции (рис. 5).

---

Рис. 5. Взаимосвязь сфингомиелинов локальных жировых депо с клиническими параметрами у пациентов с сердечно-сосудистыми заболеваниями

---

Полученные данные корреляционного анализа позволяют предположить взаимосвязь между метаболизмом SM в ЖТ сердечной локализации и нарушениями систолической (фракция выброса) и диастолической (конечно-диастолическое давление — КДД) функций ЛЖ у пациентов с ССЗ, а также с многососудистым поражением коронарного русла у лиц с ИБС (рис. 6). Однако для выяснения природы этих взаимосвязей необходимы дальнейшие исследования.

---

Рис. 6. Взаимосвязь сфингомиелинов локальных жировых депо с инструментальными параметрами у пациентов с сердечно-сосудистыми заболеваниями

---

С помощью логистического регрессионного анализа установлено, что наличие ИБС ассоциировано с более высокими сывороточными уровнями SM(d18:1/16:0) — ОШ=2,63; 95% ДИ: 2,05–3,31; р=0,003; SM(d18:1/18:0) — ОШ=1,85; 95% ДИ: 1,52–2,11; р=0,021; SM(d18:1/20:0) — ОШ=1,63; 95% ДИ: 1,33–2,0; р=0,001; SM(d18:1/22:0) — ОШ=2,0; 95% ДИ: 1,55–2,51; р=0,002; SM(d18:1/24:0) — ОШ=2,17; 95% ДИ: 1,75–2,71; р=0,011; SM(d18:1/24:1) — ОШ=2,45; 95% ДИ: 1,92–2,98; р=0,013.

Обсуждение

Результаты проведенного исследования показали, что наиболее обогащенными SM по сравнению с другими локальными жировыми депо были эпикардиальная ЖТ у пациентов с ИБС и периваскулярная ЖТ у лиц с ППС. Самым распространенным основанием SM в ЖТ являлся C18-сфингозин (d18:1 и d18:2), но также выявлен и SM С16-сфингозин (d16:0), что согласуется с данными литературы [4, 5].

Избыточный уровень SM в ЭЖТ при ИБС соответствует повышению сывороточных SM относительно аналогичных показателей в группе с ППС. При этом большинство сывороточных SM содержали насыщенные ацильные цепи (С16:0, С18:0, С20:0, С22:0 и С24:0).

Предполагается, что насыщенность ацильных цепей SM имеет важное значение для реализации биологических/патологических свойств SM. Так, H. Hanamatsu с соавт. [8] продемонстрировали, что у лиц с ожирением повышены SM с насыщенными ацильными цепями (С18:0, С20:0, С22:0 и С24:0) по сравнению с контрольной группой; они положительно коррелируют с показателями липидного спектра сыворотки крови (ОХС, триацилглицериды, ХС-ЛПНП) и индексом инсулинорезистентности HOMA-IR. При этом SM, содержащие ненасыщенные ацильные цепи, не были ассоциированы с этими показателями.

Однако A. Sigruener и соавт. [11] при изучении плазмы более 3300 человек — участников исследования LUdwigshafen RIsk and Cardiovassal Health (LURIC) — обнаружили, что длинноцепочечные насыщенные SM с основанием d18:1 (С22:0; С23:0, С24:0) демонстрируют отрицательную взаимосвязь с ИБС и общей смертностью, т.е. обладают кардиопротективными свойствами. Небольшая ассоциация с защитным эффектом была также выявлена для SM с цепями С22:1 и С23:1. Напротив, SM с цепями С16:0, С16:1, С24:1 и С24:2 показали положительную связь с ИБС и смертностью.

Интересные результаты были получены A.M. Poss с соавт. [10] при изучении взаимосвязи между сфинголипидами в сыворотке крови и ИБС. Исследуя образцы сыворотки людей с семейной ИБС (n=462) и группы контроля (n=212), авторы показали, что SM(d18:1/16:0), SM(d18:1/18:0), SM(d18:1/20:0), SM(d18:1/22:0), SM(d18:1/24:0), SM(d18:1/24:1) ассоциированы с ИБС. При этом сфинголипиды, содержащие C24:1 (ОШ — 2,66; 95% ДИ: 2,12–3,38), были наиболее взаимосвязаны с ИБС.

Анализ литературных данных относительно спектра SM в ЖТ пациентов свидетельствует о неоднозначности ранее полученных результатов. Так, M. Barchuk с соавт. [2] проводили нецелевое липидное профилирование ПЖТ и ЭЖТ у 25 пациентов с ИБС и у 14 лиц без ИБС. Авторы установили в ЭЖТ всех исследуемых лиц (n=39) значительное увеличение содержания SM(d41:1) в отличие от ПЖТ. Однако не обнаружено различий уровня SM в зависимости от нозологии ни в ЭЖТ, ни в ПЖТ.

Р. Tomášová с соавт. [12] выполнили основанный на МС липидомный анализ подкожной и эпикардиальной ЖТ у 23 пациентов с ИБС и 13 человек контрольной группы с целью выявления факторов эпикардиального жира, способствующих развитию ИБС. Авторы также не обнаружили статистически значимых различий содержания SM(36:1), SM(40:1), SM(42:2) в зависимости от локализации ЖТ и наличия ИБС.

M. Kolak с соавт. [13] провели липидомный анализ ПЖТ 20 здоровых женщин с ожирением, не страдающих диабетом, которые были разделены на группы с нормальным (n=10) и высоким (n=10) содержанием жира в печени. У лиц с высоким содержанием жира были увеличены следующие молекулярные виды SM: SM(d18:1/18:0), SM(d18:1/20:0), SM(d18:1/22:0), SM(d18:1/24:1). При этом уровни наиболее распространенного SM(d18:1/16:0) не различались между группами. Учитывая повышенную экспрессию индуцируемого гипоксией фактора 1α (HIF-1α) и тенденцию к увеличению экспрессии фактора некроза опухоли α (TNF-α) в ПЖТ лиц с высоким содержанием жира в печени, авторы сделали вывод, что длинноцепочечные жирные кислоты стимулируют синтез церамидов, которые могут вызывать воспаление ЖТ.

Результаты проведенного нами исследования указывают на независимый сфингомиелиновый профиль локальных жировых депо (и при ИБС, и при ППС выявлен одинаковый спектр SM) со специфическим обогащением SM ЭЖТ при коронарогенной патологии и ПВЖТ — при некоронарогенной патологии.

Ранее в работе [14] показана высокая концентрация SM в плазме при атеросклеротических поражениях аорты. Изучение бляшек сонных артерий человека, полученных при эндартерэктомии, также выявило повышенные уровни SM в бляшках, связанных с транзиторными ишемическими атаками, инсультом и стенозом >70% по данным УЗИ. Кроме того, уровни SM коррелировали с воспалительными цитокинами, гистологическими маркерами нестабильности бляшек и их массой.

В более поздних исследованиях с использованием МС-сканирования выявлено, что SM составляет около 80% фосфолипидов в очагах некроза атеросклеротических бляшек человека [15]. Происхождение атеросклеротических SM до сих пор не выяснено. В большинстве исследований наблюдаемые изменения объясняются повышенным поглощением липопротеинов, богатых SM, и их агрегацией. При этом ХС-ЛПНП бляшек содержат намного больше SM, чем ХС-ЛПНП плазмы [16].

Согласно нашим данным, ПВЖТ пациентов с ППС характеризуется наибольшим уровнем всех обнаруженных SM. Наблюдаемые изменения могут быть обусловлены влиянием воспаления, поскольку стеноз аортального клапана также относится к воспалительным заболеваниям [17]. При изучении аортальных клапанов 23 пациентов, перенесших операцию по замене клапана, S. Lehti с соавт. [17] показали накопление в стенозированных аортальных клапанах человека по сравнению с нестенотическими аортальными клапанами внеклеточных липидных частиц с более высоким соотношением SM — фосфатидилхолина. Изучая образцы восходящей грудной аорты, C. Doppler с соавт. [18] выявили, что уровни SM были значительно выше у пациентов с заболеванием двустворчатого аортального клапана, перенесших операцию на восходящей грудной аорте, и у лиц с расслоением аорты, связанным с трехстворчатым аортальным клапаном, по сравнению с контрольной группой. Среди метаболитов со значительными различиями между контрольной группой и группами с аневризмой восходящей грудной аорты авторы выделяют SM(C18:1), SM(C22:1), SM(C22:2) и SM(C24:1).

Таким образом, проведенный в рамках настоящего исследования сравнительный анализ свидетельствует о независимом от нозологии сфингомиелиновом спектре локальных жировых депо и сыворотки крови: при ИБС и ППС выявлен одинаковый спектр SM. Однако их содержание различалось в зависимости от заболевания. При коронарогенной патологии установлено специфическое обогащение SM ЖТ эпикардиальной локализации, при некоронарогенной — периваскулярной. Наблюдаемые изменения могут способствовать аккумуляции SM, запуская патологические процессы, ассоциированные как с ИБС, так и ППС. Кроме того, выявленный сфингомиелиновый профиль сыворотки крови шире спектра SM в ЖТ различной локализации, что может быть связано с образованием SM в печени или эндотелии кровеносных сосудов.

Полученные новые знания фундаментального характера могут служить основой для разработки стратегий фармакологической коррекции патологической активации ЖТ среди пациентов кардиологического профиля и подходов к первичной и вторичной профилактике ССЗ. Установленные ассоциации параметров сфингомиелинового профиля ЖТ с клинико-инструментальными параметрами при ССЗ свидетельствуют о взаимосвязи метаболизма SМ в ЖТ сердечной локализации и нарушений систолической и диастолической функции ЛЖ у пациентов с ССЗ с многососудистым поражением коронарного русла при ИБС, а также позволяют использовать SМ в качестве перспективных биомаркеров ССЗ. Однако для выяснения природы этих взаимосвязей необходимо проведение дальнейших исследований.

Ограничения исследования. Во-первых, это одно­центровое исследование; во-вторых, размер выборки был небольшим; в-третьих, необходимо изучение других классов липидов локальных жировых депо у пациентов с ССЗ, что планируется выполнить в дальнейшем.

Заключение

Оценка липидного спектра крови не всегда адекватно отражает локальные дисфункциональные изменения в жировой ткани и не позволяет выявить всех пациентов с высоким риском сердечно-сосудистых заболеваний. Мониторинг изменений уровня сфингомиелинов позволит оценивать и прогнозировать прогрессирование и/или тяжесть сердечно-сосудистых заболеваний, а также использовать их в качестве новых терапевтических мишеней.

Источники финансирования. Исследование вы­полнено за счет гранта Российского научного фонда №22-15-20007 «Церамидный профиль локальных жировых депо сердца: клинико-патогенетическое значение и терапевтический потенциал» (https://rscf.ru/project/22-15-20007/) и средств Министерства науки и высшего образования Кузбасса.

Конфликт интересов. Авторы декларируют отсут­ствие явных и потенциальных конфликтов интересов, связанных с публикацией настоящей статьи.