Чувствительность клеток линии Hela Kyoto, трансфицированных сенсором HyPer2, к действию цисплатина
Цель исследования — с использованием МТТ-теста провести сравнение цитотоксического действия цисплатина в отношении клеток линии HeLa Kyoto и линии HeLa Kyoto, содержащей генетически-кодируемый сенсор пероксида водорода HyPer2 (линия HeLa Kyoto–HyPer2), и с помощью метода окрашивания трипановым синим выявить дозы цисплатина, вызывающие гибель клеток при различных сроках воздействия.
Материалы и методы. Использованы клеточная линия карциномы шейки матки человека HeLa Kyoto и линия HeLa Kyoto, трансфицированная цитоплазматическим сенсором пероксида водорода HyPer2 (HeLa Kyoto–HyPer2). Анализ цитотоксического и антипролиферативного действия цисплатина в отношении данных клеток проведен с помощью МТТ-теста. Определяли жизнеспособность клеток после 24 ч инкубации с препаратом в концентрациях от 0 до 50 мкмоль/л, далее в период 0–24 ч с интервалом 2 ч — при концентрации IC50; а также после 2, 4, 6, 8 ч при концентрациях от 9,6 до 833,3 мкмоль/л подсчитывали количество живых и погибших клеток после окрашивания трипановым синим.
Результаты. По данным МТТ-теста построена кривая зависимости жизнеспособности клеток HeLa Kyoto и HeLa Kyoto–HyPer2 от концентрации цисплатина в среде. Установлено, что концентрация IC50, которая соответствует дозе, вызывающей потерю жизнеспособности 50% клеток, для HeLa Kyoto–HyPer2 в 1,3 раза ниже, чем для HeLa Kyoto. По результатам окрашивания витальным красителем трипановым синим выявлено, что ингибирующие эффекты цисплатина в концентрации IC50 к 24 ч связаны главным образом с торможением деления клеток, а не с их гибелью. При концентрациях до 52 мкмоль/л повреждение мембран не возникает в течение 8 ч, а при сверхвысоких концентрациях — 416,7 мкмоль/л — повреждение возможно уже после 4 ч экспозиции.
Заключение. Сравнение чувствительности двух клеточных линий к действию цисплатина показало, что трансфекция клеток флюоресцентным белком вызывает повышение чувствительности к препарату. При воздействии на клетки HeLa Kyoto–HyPer2 препаратом в концентрации IC50 в течение 24 ч наблюдается ингибирование деления клеток, а повышение концентрации препарата вызывает увеличение числа погибших клеток и снижение сроков их гибели.
